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仪器介绍

实验目的：

本试验检测受试物是否引起培养的哺乳动物细胞染色体畸变,以评价受试物致突变的可能性

实验概述：

在加入和不加入代谢活化系统的条件下,使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中用中期分裂相阻断剂如秋水仙素或秋水仙胺处理,使细胞停止在中期分裂相,随后收获细胞,制片,染色,分析染色体畸变

大部分的致突变剂导致染色单体型畸变,偶有染色体型畸变发生虽然多倍体的增加可能预示着有染色体数目畸变的可能,但本方法并不适合用于测定染色体的数目畸变

应用范围

应用于科研农业卫生教育雾霾状态可吸入颗粒染毒效果研究等各个领域

符合标准：

GB/T 15670.19-2017《农药登记毒理学试验方法第19部分:体外哺乳动物细胞染色体

畸变试验》

二试验流程

1细胞培养

选择合适细胞系在含血清培养基中培养至对数生长期

2受试物处理

设置多个浓度组需包括细胞毒性评估如50%生长抑制浓度

阳性对照如丝裂霉素C环磷酰胺等已知诱变剂

阴性对照溶剂对照

3.代谢活化系统S9混合液

模拟体内代谢用于检测需代谢激活的致突变物如加Aroclor 1254诱导的大鼠肝S9

4.采样时间

短期处理:1个细胞周期通常24小时含或不含S9

长期处理:覆盖多个细胞周期如48小时

5染色体制备

秋水仙素或秋水仙胺处理:阻断中期细胞

低渗处理KCI溶液使细胞膨胀

固定甲醇:冰醋酸=3:1后滴片Giemsa染色

6镜检分析

显微镜下观察至少200个中期分裂相记录畸变类型和频率

三仪器与试剂

关键仪器：

培养箱生物安全柜离心机显微镜配备油镜和图像分析系统

染色体自动扫描仪可选

主要试剂:

细胞培养基胎牛血清胰蛋白酶

秋水仙素Giemsa染液S9混合液